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重大突破:CTC的代谢分析-单细胞的分子PET,让肿瘤无处遁形

CTC与肿瘤

  循环肿瘤细胞(CTCs)是液体活检的有利靶点,是肿瘤预后和监测的重要生物标志物。目前,CTCs的检测主要包括计数及基于上皮-间质转化(EMT)标志物的分型(上皮型E-CTCs/间质型 M-CTCs/混合型H-CTCs)。然而,由于EMT和间质-上皮转化(MET)的动态变化,静态形态学分析可能不能很好的确定CTCs的变化和预后。目前尚不清楚是否所有具有相同EMT表型的CTC都能够通过转移级联形成转移。因此,迫切需要开发生物功能活性标志物来评估CTCs在癌症转移中的实际作用。

糖代谢与肿瘤

  线粒体氧化磷酸化是正常细胞的主要能量来源。然而,由于线粒体功能受损,肿瘤细胞的能量来源主要依赖于糖酵解(即使在富氧环境下)、磷酸戊糖途径和谷氨酸水解增强。上述过程可促进前体分子的累积和信号通路的激活,从而调节细胞的增殖和迁移。前期研究表明:细胞源性恶性肿瘤与糖酵解模式的代谢转化密切相关。

“PET-CTC”的研究意义

  利用代谢特征确定CTCs生物功能活性分析的指标,探讨代谢标志物在CTCs检测中的可行性,评估PET-CTC在癌症转移中的作用。

作为一个“开放•兼容”的液体活检技术平台,近日,CanPatrol®又添新标签“PET-CTC”:结合tPSA>20ng/mL,Gleason评分≥8和GM+CTCs≥3/5mL可提示前列腺癌转移风险高。此项研究成果发表于国际著名医学杂志《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》。


文章题目:前列腺癌循环肿瘤细胞代谢调控基因特征的研究
发表杂志:《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》
影响因子:6.217
合作单位:南方医科大学南方医院
原文检索:PMID:29954422;DOI:10.1186/s13046-018-0789-0


“PET”基因的确定

研究对象:五种具有不同转移能力PCa(前列腺癌)细胞系(PC-3 M 2B4、PC-3 M 1E8、LNCAP、PC-3、DU145)。
研究方法:功能芯片,实时荧光定量PCR,免疫印迹,划痕实验,细胞迁移和侵袭实验。
研究结果:鉴定出8个转移相关的代谢基因,包括HK2、PDP2、G6PD、PGK1、PHKA1、PYGL、PDK1和PKM2。


PCa细胞系转移相关代谢基因的筛选与验证

a. 功能芯片2B4和1E8细胞代谢基因图谱聚类分析;b.芯片分析结果中1E8细胞较2B4细胞上调基因(差异倍数 > 1.5 和 P

PGK1/G6PD是评价CTCs糖代谢的最佳标志物

研究对象:常见癌症组(64例临床标本:12例肝癌、14例肺癌、10例鼻咽癌、9例食管癌、6例前列腺癌、13例宫颈癌)。
研究方法:RNA原位杂交技术,层次分析法(AHP)。
研究结果:

  常见癌症组的64例患者中,有40例患者CTCs检测为阳性(≥3CTCs/5mL)。这40例患者被随机分成了8组,检测CTCs中的HK2、PDP2、G6PD、PGK1、PHKA1、PYGL、PDK1和PKM2基因。我们总共分离分析了436个CTCs。8个代谢基因在CTCs中的表达率不同。

三种EMT表型CTCs中葡萄糖代谢标志物的mRNA表达

  此外,我们评估了不同亚型CTCs中代谢基因mRNA的表达。其中E-CTCs 77个,H-CTCs 226个,M-CTCs 133个。8个代谢基因mRNA的表达在CTCs不同亚型中发生变化。

常见癌症组患者E-CTCs、H-CTCs、M-CTCs中转移相关糖代谢基因mRNA表达情况

  基于层次分析法(AHP)我们对8个代谢基因建立性能评价模型,最终确定PGK1和G6PD是评价CTCs糖代谢的最佳标志物

基于层次分析法(AHP)的8个代谢基因性能评价模型

PCa患者组GM+CTCs的临床意义

研究对象:PCa患者组(54例前列腺癌标本:未转移25例,转移29例)。
研究方法:RNA原位杂交技术,相关性分析和ROC曲线分析。
研究结果:
PCa患者组CTCs检测(≥1/5mL,范围1~33/5mL)阳性率为83.3%(45/54)。64.8%(35/54)的PCa患者组中检测到GM+CTCs(PGK1/G6PD标记)(范围1~19/5mL)。阳性CTCs和GM+CTCs数量分别占总数的55.6% (30/54) 和31.5% (17/54)。
以PGK1和G6PD为标记的GM+CTCs与患者临床分期、肿瘤转移及血清tPSA水平密切相关,表明GM+CTCs作为总CTCs中具有高侵袭性的亚群,可能是提示肿瘤恶性程度和进展更为准确的标志物。

PCa患者组临床特征与GM+CTCs和总CTCs相关性

PCa患者组临床分期、肿瘤转移及血清tPSA水平与GM+CTCs相关性

  与EMT CTCs亚型相比,GM+CTCs的ROC曲线下面积(AUC)更高(0.780 vs CTCs 0.729,H-CTCs 0.741,M-CTCs 0.648)。

E-CTCs、H-CTCs、 M-CTCs 、GM+CTCs 和总CTCs的ROC曲线

  三联tPSA-Gleason-GM+CTCs标志物增加AUC至0.904,优于tPSA-Gleason-H-CTCs标志物(0.874)。


结论

  • 与现有的CTCs形态学分类方法(基于EMT标志物鉴定)比较,代谢基因标志物(PGK1/G6PD)被确定为CTCs生物功能活性分析的指标。
  • CTCs的代谢基因特征表明:高代谢GM+CTCs有望成为前列腺癌转移的生物学标志物。
  • 结合tPSA>20ng/mL,Gleason评分≥8和GM+CTCs≥3/5mL提示前列腺癌转移风险高,其敏感度为82.8%,特异性为88.0%。

结语

增强CTC特异性,分析CTC活性状态

可视化还原更清晰的液体活检世界

CanPatrol®让肿瘤无处遁形!


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